2020年5月6日，JAMA雜志總結(jié)了新型冠狀病毒各種檢測(cè)方法，以及敏感性隨時(shí)間的變化規(guī)律。在病毒感染后，能夠最早檢出的方法是鼻咽拭子/唾液的核酸檢測(cè)，敏感性較高。而抗體水平一般在癥狀出現(xiàn)的第二周開(kāi)始增加，IgM和IgG甚至在癥狀出現(xiàn)后的第四天就被檢測(cè)為陽(yáng)性，但更高的抗體水平發(fā)生在疾病的第二周和第三周，見(jiàn)圖1。

圖1 核酸和抗體檢測(cè)時(shí)間窗

2020年5月9日，上海市醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)發(fā)表了新型冠狀病毒核酸和抗體檢測(cè)臨床應(yīng)用專家共識(shí)。該文論述了新型冠狀病毒核酸和抗體檢測(cè)的標(biāo)本采集、標(biāo)本送檢、標(biāo)本檢測(cè)、生物安全要求等四個(gè)方面。本共識(shí)適用于從事新型冠狀病毒核酸和血清抗體檢測(cè)的臨床實(shí)驗(yàn)室，旨在規(guī)范我國(guó)新型冠狀病毒核酸和抗體檢測(cè)方法與流程，為臨床提供規(guī)范可靠的檢測(cè)結(jié)果與合理的報(bào)告解讀。本文將新型冠狀病毒抗體檢測(cè)部分重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行總結(jié)，具體敘述如下：

1、抗體檢測(cè)標(biāo)本

血清、血漿、靜脈全血樣本都可以進(jìn)行抗體檢測(cè)，成人建議采集3~5 mL全血以保證能分離獲得足量的血清。全血樣本可直接使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝采血管。

2、標(biāo)本送檢

2.1 送檢時(shí)間和溫度控制

標(biāo)本采集后應(yīng)30 min內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，不宜超過(guò)2 h。樣本抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，血清樣本應(yīng)盡快離心，避免溶血。

2.2 樣本保存

血清及全血樣本如果在5 d內(nèi)可完成檢測(cè)則保存在2~8 °C，全血樣本不得凍存。血清樣本若5 d內(nèi)無(wú)法檢測(cè)則應(yīng)置于-70 °C 或以下保存，如無(wú)-70 °C保存條件，則于-20 °C 冰箱暫存。標(biāo)本避免反復(fù)凍融。條件允許時(shí)應(yīng)配備標(biāo)本保存監(jiān)控裝置。

3、標(biāo)本檢測(cè)

3.1 血清抗體檢測(cè)

· 新型冠狀病毒肺炎發(fā)病3~5 d后，血清特異性抗體逐漸產(chǎn)生，首先出現(xiàn)的是免疫球蛋白IgM抗體，然后出現(xiàn)IgG抗體。

· 《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》明確將抗體檢測(cè)結(jié)果納入確診病例的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以及疑似病例的排除標(biāo)準(zhǔn)。如果疑似病例血清特異性IgM和IgG抗體陽(yáng)性，IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或恢復(fù)期較急性期有4倍及以上升高，則可以診斷其感染了新型冠狀病毒。

· 疑似病例的排除標(biāo)準(zhǔn)，需要同時(shí)滿足病毒核酸檢測(cè)結(jié)果陰性，以及發(fā)病7 d后新型冠狀病毒IgM和IgG抗體仍為陰性兩個(gè)條件。

· 研究中發(fā)現(xiàn)，有些患者無(wú)法觀察到新型冠狀病毒IgG抗體出現(xiàn)4倍及以上升高，這可能與檢測(cè)抗體時(shí)已進(jìn)入了IgG抗體平臺(tái)期有關(guān)，因此對(duì)這些患者建議結(jié)合流行病史、臨床癥狀和影像學(xué)檢查來(lái)綜合判斷。

3.2 血清抗體檢測(cè)方法（見(jiàn)表1）  

表1 不同抗體檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較

3.3 抗體檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量保證

3.3.1 性能驗(yàn)證

性能驗(yàn)證參數(shù)至少包括精密度、符合率和檢出限，同時(shí)還需要在臨床檢測(cè)過(guò)程中累積通過(guò)室內(nèi)質(zhì)控和臨床樣本檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)，以及與其他實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果對(duì)比開(kāi)展進(jìn)一步的評(píng)價(jià)和其他性能指標(biāo)的驗(yàn)證（如精密度、符合性等）。通過(guò)性能驗(yàn)證形成實(shí)驗(yàn)室最優(yōu)的檢測(cè)系統(tǒng)，建立具有可操作性的SOPs。

3.3.2 質(zhì)量控制

建議每批檢測(cè)設(shè)立一個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控、一個(gè)陰性質(zhì)控；陽(yáng)性質(zhì)控檢測(cè)為陽(yáng)性，陰性質(zhì)控檢測(cè)為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報(bào)告，應(yīng)分析原因，必要時(shí)重新檢測(cè)樣本。對(duì)所用儀器進(jìn)行驗(yàn)證和校準(zhǔn)，對(duì)儀器（如涉及2臺(tái)或以上儀器）、人員（所有檢測(cè)人員）、方法（如涉及2種不同試劑/方法）和試劑（不同批號(hào)間或運(yùn)輸批號(hào)間）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比對(duì)。建議弱陽(yáng)性樣本應(yīng)至少用2個(gè)廠家的試劑復(fù)核檢驗(yàn)，盡可能使用包被抗原基本一致的試劑盒，若包被抗原不一致可能檢測(cè)結(jié)果有所不同，例如包被 S、N 或 S+N 的不同，檢測(cè)結(jié)果有可能不一致。

3.3.3 核酸、抗體聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告

新型冠狀病毒肺炎發(fā)病3~5 d 后，血清特異性抗體逐漸產(chǎn)生，首先出現(xiàn)的是免疫球蛋白 IgM 抗體，然后出現(xiàn) IgG 抗體。因此，IgM 抗體陽(yáng)性提示近期急性感染，IgG抗體陽(yáng)性提示既往感染。血清特異性抗體陽(yáng)性并不能說(shuō)明患者沒(méi)有傳染性，體內(nèi)還可能有少量病毒復(fù)制。因此，抗體的出現(xiàn)不能作為出院的標(biāo)準(zhǔn)，抗體在疾病痊愈后可以維持很長(zhǎng)時(shí)間。抗體檢測(cè)主要用于回顧性診斷以及對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果存疑時(shí)的輔助診斷，不能用于新型冠狀病毒肺炎的確診和排除，僅在無(wú)法使用 RT-PCR 時(shí)才建議使用血清學(xué)進(jìn)行診斷，不適用于一般人群的篩查。

IgM/IgG 初次檢測(cè)可能出現(xiàn)的結(jié)果有 IgM（+）/IgG（-）、 IgM（+）/IgG（+）、 IgM（-）/IgG（+）和 IgM（-）/IgG（-）4種模式，可按表2流程進(jìn)行檢測(cè)以判斷患者是否為急性或近期感染。

表2 核酸和抗體聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果判讀

核酸陰性結(jié)果也不能排除新型冠狀病毒感染，需要排除可能產(chǎn)生“假陰性”的因素，抗體檢測(cè)也可能會(huì)出現(xiàn)“假陽(yáng)性”和“假陰性”結(jié)果，見(jiàn)表3。因此，抗體檢測(cè)必須采用IgM和IgG同時(shí)檢測(cè)且通常需多次（2次以上）動(dòng)態(tài)檢測(cè)確認(rèn)。

表3 核酸和抗體的“假陰性”和“假陽(yáng)性”因素總結(jié)

共識(shí)指出，核酸和抗體檢測(cè)結(jié)果不能作為新型冠狀病毒肺炎確診和排除的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者流行病學(xué)史、臨床癥狀和其他實(shí)驗(yàn)室檢查綜合判斷。